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新冠核酸检测过程中无内参的原因分析

日期:2022-10-31 20:45:33 来源:中华检验医学网 点击:


作者 | 栾建伟

单位 | 辽宁省东港市中医院检验科




【前言】


核酸检测是新型冠状病毒确诊和筛查的重要手段,也是常见的实验室检测方法之一,并且它是目前能较早确定是否感染病毒以及早发现和早治疗最有效的检测方法。核酸检测阳性可以作为新型冠状病毒感染确诊的金标准。


对于新型冠状病毒的核酸检测过程中样本的采集、保存、转运,样本核酸的提取和扩增检测、结果的判读均须严格按照要求进行。


通过一段时间的核酸检测实验室工作的经历,逐渐的发现了一些影响检测结果的细节问题。其中最令人头痛的是基因检测扩增结束以后,在结果判读的时候发现检测样本没有内参。通常可以发生个别孔没有内参,也有整板都没有内参的情况。


内参,其实就是内参基因,它是实时荧光定量PCR[1]中的内参基因,通常是一段与靶序列共同扩增的非靶序列分子,因此能够对样本的检测环节进行监测,是核酸检测质量的重要指标之一。内参主要分为内源性内参和外源性内参。目前应用较多的核酸检测试剂盒主要为内源性内参。



内源性内参是人体的管家基因,在人的各组织和细胞中表达相对恒定,因此也可以通过采集的鼻咽拭子等标本获取。由于与样本中的靶基因经历完全相同的处理程序,因此可以监控新冠核酸检测的全流程,包括采样、保存运输、样本提取、扩增等过程。

在进行核酸检测时,如果内参有曲线,绝大多数情况下说明,采样运输、提取及扩增没有问题。反之,如果内参没有曲线,无论目的基因是否有曲线,说明核酸检测的整个过程中某个环节出现了问题,核酸检测结果是不可信的,容易造成假阴性[2]。即进行核酸检测的时候“有内参不一定行,但无内参一定不行”。需要查找到原因后重新进行检测。


内源性内参无曲线为实验中常见的异常结果之一,通过查阅资料和实践经历,对没有内源性内参的原因总结有以下几个方面:


一、采样环节


新冠病毒感染人体之后,首先会在呼吸道系统中进行繁殖,因此医护人员可以通过使用拭子刮取受检者鼻咽部的组织和分泌物,然后将拭子头部折断,放进合格的病毒保存液[3]中保存、运输,最后送到实验室进行核酸检测。如果采样部位和方法不达标,可能采集不到或者采集到不足量的人体组织和细胞,就会造成检测结果没有内参。


同时,如果进行环境和物体表面的核酸检测的时候,因为环境中和物体表面通常不会有大量的人体组织和细胞,达不到核酸检测的拷贝数,可能检测结果也不会有内参,这种情况是正常的。


二、保存运输环节


获得患者样本后,需尽快进行检测,标本采集后室温放置不超过4小时,应在2-4h内送到实验室。如无法立即检测需要转运的样本,应按照说明书的要求,采用干冰等制冷方式进行保存,严格按照相关规定包装运输,并送到实验室进行检测。如果标本保存不当,造成核酸降解,也会造成无内参的情况。


三、核酸提取环节


1、加样前样本没有充分震荡混匀,病毒保存液中的基因浓度不均一,可能造成加样时核酸浓度不足。


2、向裂解板中加样本时漏加或者加串孔。


3、提取仪上的各个试剂板的顺序或者方向摆放错误,也包括不同提取仪之间的试剂板用串。


4、提取前磁珠未充分混匀以及未安装使用磁棒套。


5、各提取试剂在仪器上准备好以后没有运行,一段时间后直接将洗脱板卸下,送到扩增环节。


6、提取仪发生故障等。


四、基因扩增环节


1、反应液配置不合格或者试剂反复冻融,造成反应液失效。

2、反应孔中漏加反应液。

3、反应孔中漏加提取液。

4、反应孔中混入酒精、核酸清除剂等。

5、程序操作的时候点错核酸列或者选错扩增程序等等。

6、实时定量PCR扩增仪发生故障。


【总结】


几个小时的核酸检测是一个非常漫长的过程,整个过程中的每一个操作环节都有可能影响检测结果,所以每个环节都应该规范化管理,严格按照操作规程来进行。出现样本内参异常结果时也应细心观察、耐心分析,查找原因,最终保证核酸检测的质量。


【专家点评】


辽宁省东港市中医院检验科主任、主任技师  王乐  


医学检验是一种光荣而神圣的职业,扎实的专业理论基础、娴熟的实践操作技术和认真负责的工作态度还是远远不够的。在工作中,还会遇到很多的麻烦、困难、特殊情况,需要具备灵活清醒的头脑,沉着稳重、临危不乱的心态,始终有一颗爱心,多一份细心。


新冠疫情对我们检验人员来说,无论是心理上还是身体上都是一次大考。面对疫情我们每一位检验人都在默默付出,没有退缩,迎难而上。当疫情来临,他们24小时工作不停,用快速准确的结果为疫情防控提供可靠依据;他们就是检验科医生,离病毒最近的无名英雄。摘掉口罩面屏后的检验科医生们只有一个朴素的心愿,那就是且盼疫情消弭、春暖花开,你我恢复日常,神州繁华与共。



【参考文献】

[1]郭晓波,蔺京,来春艳,等.新型冠状病毒与实时荧光RT-PCR核酸检测[J].陕西医学杂志,2020(3):3.

[2]张瑞,李金明.如何减少新型冠状病毒核酸检测的"假阴性"[J].中华医学杂志,2020, 100(00):E008-E008.

[3]高歌,高利飞,杜美,等.一种核酸保存液及其应用,含有该核酸保存液的质控品:,CN110684869A[P]. 2020.




END




(责任编辑:labwebx)

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