那些新冠核酸检测的怪“线”状

作者 | 叶溪

自2019年12月底新冠疫情发生以来，应国家政策要求，新冠核酸检测实验室纷纷在各个医院建成并投入使用，也让核酸检测走入了千家万户，与我们的学习、工作、生活息息相关。

从事新冠核酸检测工作的检验人，既会经历波澜不惊的平常时候，也会经历惊心动魄的惊险时刻，期间难免会遇到了一些奇奇形怪状的扩增曲线，总结起来可谓是一部实验室版的“冠”场线形记。且看：

最常见，通常表现为某孔或者某列标本的内标线没有S型扩增。

1、标本采集不当，没有采到人体细胞；

2、标本保存不当，核酸降解；

3、提取失败：提取板加样方向错误、蛋白酶K加错列、样本加错位置或漏加、提取仪器故障等；

4、扩增失败：漏分反应液、点错核酸列、选错扩增程序，加模板时吸到有磁珠造成干扰、酒精等消毒剂携带入孔等。

较为常见，表现为阴性对照、生理盐水，或者试剂空白内标出现阳性扩增曲线。

1、操作不规范，有标本残液或气溶胶通过加样枪、镊子、手等造成携带污染；

2、生物安全柜、实验操作台、环境等消毒清洁不到位。

整体内标曲线相对离散不集中，各孔高低异常不平。

1、标本固有的采样误差（一般比较集中）；

2、操作误差：标本加样前没有充分振荡混匀，反应液配制时没有充分混匀；

3、提取仪器故障，提取效率有明显差异。

整体扩增曲线明显分层，有高有低。

1、 新配制反应液与旧的剩余反应液联合使用，酶的活性不同；

2、 不同批次的PCR八联管联合使用，荧光信号透过强度有区别。

3、 不同品牌的提取试剂联合使用，提取效率有区别。

4、 同一批点样的核酸放置时间有不同，时间较长的有部分降解。

某孔或者某批各通道扩增曲线均出现剧烈或明显的曲折。

1、反应体系内有大气泡形成折射，干扰荧光的采集。

2、PCR仪进行荧光检测时，受到剧烈震荡。

一个或多个孔N/ORF1ab检测通道出现典型或者非典型的S型扩增曲线

1、 阳性质控品处理不够小心，造成污染。

2、 环境中荧光物质，如手套滑石粉等污染，产生非特异荧光信号。

N/ORF1ab检测通道整体的扩增曲线尾部向上翘，出现宽大的“尾巴”。

1、配制好的反应液放置时间过长，或者反复冻融，造成荧光探针断裂；

2、反应液受到荧光物质的污染，如滑石粉等。

阳性或者弱阳性质控出现一个或多个基因扩增失败。

1、错用不同品牌的质控品，扩增片段不同；

2、同一品牌不同批号的质控品混用，扩增片段可能存在批间差异；

3、质控品保存不当造成降解，或者处理不当造成基因片段浓度不均匀，如用前没有充分混匀。

某孔或某批三个通道的阴性扩增曲线整体呈现往上爬长坡的现象。

1、选用的PCR八连管质量不佳或者没有配套使用，从而造成管盖不严密；

2、盖盖子用力不当造成盖子或管子有裂损，反应液逐渐蒸发。 

某孔的某通道出现往上爬长坡的扩增曲线，通常是生理盐水的内标通道。

该孔的基线阈值的终点循环数设置不合适。

每一次遇到怪线状，对于我们检验人来说，都是一次很好的学习机会。每一个问题的出现，应该是有原因的。如果我们以问题为导向进行破案，复盘实验过程，每个环节抽丝剥茧，每个步骤明察秋毫，原因定会水落石出。“吃一堑，长一智”，找到原因所在并持续改进，争取把核酸检测工作做得更精益更细致。

END