PCR反应中核酸稀释液的选择

作者 | 陈祥娃

单位 | 西南医科大学附属医院

PCR扩增过程中，选择一个合适浓度的DNA模板对扩增结果起着至关重要的作用，因此临床分子实验室常常会对提取的核酸进行稀释，以获得一个最适的DNA模板浓度。DNA溶解液、洗脱液和蒸馏水……这些常见的溶剂，哪种才是最适宜的核酸稀释液呢？本文设计了几个小实验，对比分析了几种常见的核酸稀释液对核酸浓度及纯度的影响，以筛选出一种最适的核酸稀释液。

使用博奥晶典呼吸道病原菌核酸检测试剂盒中的玻璃珠提取痰液标本中的核酸，分别使用洗脱液、蒸馏水及DNA溶解液对提取到的核酸进行稀释，赛默飞nanodrop超微量分光光度计检测核酸浓度及纯度。

结果如表1所示，核酸经洗脱液、蒸馏水及DNA溶解液稀释3倍后，方差分析结果表明核酸浓度及A260/A280比值的均值差异无统计学意义；与洗脱液处理组相比，蒸馏水处理组及DNA溶解液处理组的A260/A230比值显著降低，差异具有统计学意义。

表1不同稀释液对核酸浓度及纯度的影响

DNA中嘌呤及嘧啶环的共轭双键均具有吸收紫外线的性质，最大吸收峰在260nm波长处，碳水化合物的最大吸收峰在230nm左右，蛋白质的最大吸收峰在280nm左右，因此使用A260/A280和A260/A230两个比值可以反映核酸的纯度。

A260/A280比值大于1.8表示样品DNA纯净，反之则存在蛋白质的污染，本次实验发现三种稀释液对核酸的A260/A280无显著影响；而A260/A230比值小于2.0则表明样品存在碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂的污染，本次实验表明蒸馏水（灭菌注射用水）和DNA溶解液均会导致A260/A230比值小于2.0，因此核酸稀释时不建议采用上述两种稀释液，建议采用洗脱液。

此外，DNA的溶解需要合适浓度的NaCl及PH环境，故蒸馏水及超纯水等不适合用于DNA稀释中。

综上，在常规的PCR扩增反应实验中，提取好的核酸最好使用TE洗脱液保存或稀释。

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