新型冠状病毒核酸实验室假阳性结果增多的分析处理

北海市中医医院医学检验科黄日昇 陈文雄  邓家庆

前言

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是一种新型β属冠状病毒,属于单链RNA病毒,是引起新型冠状病毒肺炎（COVID-19）主要病原微生物^[1]。根据世卫组织最新实时统计数据，截至欧洲中部时间11月28日15时48分（北京时间11月28日22时48分），全球累计新冠肺炎确诊病例61299371例，累计死亡病例1439784例，28日全球新冠肺炎确诊病例新增747082例，死亡病例新增13296例。实时荧光RT-PCR作为SARS-CoV-2确诊病例的诊断标准之一，是疫情其中主要的实验室检测手段^[2-3]，在疫情防控中起到非常重要的作用，但同时也暴露了众多新冠冠状病毒核酸实验室的短板与不足。本案例旨在通过新型冠状病毒核酸实验室假阳性增多的分析处理，为病原微生物安全防护提供建设性意见。

案例经过及分析

根据SARS-CoV-2检测实验室工作人员反映，2020年6月20日至2020年6月23日期间SARS-CoV-2核酸检测假阳性结果增多，主要表现形式为：阴性对照样品出现扩增曲线（图1、图2）；假阳性样品突发式增多伴随阳性孔位不确定性（图3、图4）。

图1：阴性对照样品出现扩增曲线

检测日期：2020年6月20日

图2：阴性对照样品出现扩增曲线

检测日期：2020年6月21日

图3：假阳性样品突发式增多

伴随阳性孔位不确定性

检测日期：2020年6月20日

图4：假阳性样品突发式增多

伴随阳性孔位不确定性

检测日期：2020年6月21日

2020年6月23日，SARS-CoV-2核酸检测实验室召开紧急会议，询查实验室工作人员近期检测流程情况，并跟踪了当天第一批SARS-CoV-2检测全过程，并没发现违反检测流程的现象，会议决定对SARS-CoV-2核酸检测实验室的环境监测点进行SARS-CoV-2核酸检测分析。

采样方法为：实验活动与环境消毒前，使用病毒采样拭子蘸取H3-1采样液，对实验室操作台面（5×5×4CM²）、移液器表面及吸嘴部分、储存冰箱及传递窗把手、核酸提取仪表面、荧光定量基因扩增仪扩增仓、生物安全柜内壁反复涂抹，然后采样拭子回收洗脱至H3-1采样管；空气监测则使用空气沉降法，H3-1采样管开盖使采样液暴露于固定监测位置（<30M²放置3个点，>30M²放置5个点）30Min。监测结果如表1。

表1核酸检测实验室环境监测点SARS-CoV-2核酸检测结果[N(%)]

根据上述新冠核酸实验室环境监测点SARS-CoV-2核酸检测结果判断，试剂准备区与标本制备处理区所有环境监测点SARS-CoV-2核酸检测结果阴性，而扩增及产物分析一区环境监测点均出现SARS-CoV-2核酸检测结果阳性，那么是实验室污染了吗？如果是又属于

什么类型污染呢？污染源来自哪里？如何清除污染源？

实时荧光RT-PCR作为高灵敏度的检测手段，极其微量的样品或者污染物也能扩增检出，即在本不该出现荧光信号的阴性样本、阴性对照（生理盐水）或空白对照中出现了阳性的荧光信号（扩增曲线），出现假阳性结果而误导临床诊断或者浪费试剂耗材。新冠核酸实验室污染的表现多为：假阳性的渐进式、散发式、突发式增多，同时更多的案例表现为阴性对照出现阳性荧光信号（扩增曲线），因此该新冠核酸实验室极大可能已被污染。

据报道目前核酸实验室污染的主要类型有：①标本污染；②试剂污染；③扩增产物污染；④设备污染；⑤其他污染^[4]。标本污染主要是容器被污染、容器密封不严造成样品被污染等；试剂污染主要是在体系试剂配制加样过程中，由于加样器、容器、双蒸水、阴性对照及其它试剂被PCR核酸模板或阳性对照污染；扩增产物污染主要是PCR实验室中最主要、最常见的污染。