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阳性报警时间预测血培养葡萄球菌评价

日期:2015-10-31 09:55:18 来源: 检验医学杂志 点击:

作者:北京大学第一医院检验科  黄磊, 孙立颖, 严岩

金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus, SA)是引起菌血症和脓毒血症的常见病原菌之一,可引起严重后果,据统计SA菌血症的死亡率约为20%[1,2]。凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase negative Staphylococcus, CoNS)为人体皮肤的正常菌群,有研究表明在血培养中分离到的CoNS少数为病原菌,多数为皮肤表面的污染菌[3,4]。此外临床上治疗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(methicillin-susceptible Staphylococcus aureus, MSSA)感染时选用的抗菌药物不同[5]。因此在血培养阳性报警后涂片观察到葡萄球菌时,早期、快速区分SA、CoNS和MRSA对指导临床合理用药具有重要意义。血培养阳性报警时间(time to positivity, TTP)是指把血培养瓶放入血培养仪到产生阳性信号所用的时间,可由仪器自动记录,其与细菌初始浓度和菌株自身生长速度有关,并能预测感染部位和患者预后[6]。与其他鉴定方法相比,TTP具有快速、简便、成本低廉等优点。本研究分析了TTP在预测SA、CoNS和MRSA中的价值。

材料和方法

一、入选菌株

收集北京大学第一医院2008至2012年血培养阳性标本中的SA和CoNS(包括表皮葡萄球菌、人葡萄球菌、溶血葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间葡萄球菌、施氏葡萄球菌等)。考虑到不同血培养瓶对TTP可能的影响,本研究仅纳入需氧瓶(包括成人和儿童的需氧瓶),未纳入厌氧瓶。对同一患者血培养中不同时间分离到的重复菌株,仅选取首次分离株纳入本研究。排除2种及2种以上细菌或真菌混合感染的情况。

二、仪器

所用仪器为BACTEC9240自动化血培养仪及配套的血培养瓶(成人需氧瓶和儿童瓶),购自美国BD公司。

三、方法

将采血后的血培养瓶立即运送至微生物室,上机培养。血培养样本阳性报警后转种培养18~24 h,挑取单个菌落用VITEK 2 Compact自动化鉴定仪进行细菌鉴定和药物敏感性试验。从BACTEC 9240自动化血培养仪连接的EpiCenter数据库中查询并记录各菌株的TTP。从检验科的实验室信息系统(laboratory information system, LIS)中回顾不同SA菌株对苯唑西林的敏感性,据此判断SA为MRSA或MSSA。

四、统计学方法

运用SPSS 13.0软件进行统计学分析。用Kolmogorov-Smirnov检验判断样本是否为正态分布。用独立样本 t检验比较SA和CoNS的TTP及MRSA和MSSA的TTP。用MedCalc12.4.0软件绘制受试者工作特征(receiver operator characteristic, ROC)曲线,分析TTP的诊断价值。包括确定诊断切点,计算曲线下面积(area under the curve, AUC),进而判断TTP预测不同菌株的准确性。准确性的判断标准如下:AUC>0.9表示准确性较高,0.7≤AUC≤0.9表示准确性为中等,0.5[7]。

结果

一、菌株基本特征及TTP

本研究共纳入葡萄球菌354株,其中SA为101株(MRSA为51株,MSSA为50株),CoNS为253株。SA和CoNS的TTP分别为(16.63±7.47) h和(24.61±11.09)h。MRSA和MSSA的TTP分别为(18.22±8.15)h和(15.01±6.40)h,TTP分布情况见图1:


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图1 不同菌株的TTP分布图

各组菌株中分离自儿童瓶与成人需氧瓶的TTP差异无统计学意义( P>0.05),故不需要在各组菌株中对儿童瓶和成人需氧瓶进行分组统计TTP。

二、SA和CoNS的TTP比较

经Kolmogorov-Smirnov检验,SA和CoNS的TTP符合正态分布。经独立样本 t检验,两者的TTP差异有统计学意义( P<0.05)。ROC曲线表明,TTP≤16.90 h可作为区分SA和CoNS的切点,其敏感性为62.4%,特异性为79.4%,AUC为0.758(95%可信区间为0.710~0.802),准确性为中等。见图2:


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图2 ROC曲线分析TTP对预测SA和CoNS的价值

100-特异性(%)

三、MRSA和MSSA的TTP比较

经Kolmogorov-Smirnov检验,MRSA和MSSA的TTP符合正态分布。经独立样本 t检验,两者的TTP差异有统计学意义( P<0.05)。ROC曲线分析表明,TTP>12.58 h可作为区分MRSA和MSSA的切点,其敏感性为80.4%,特异性为50.0%。AUC为0.630(95%可信区间为0.528~0.724),准确度较低。见图3:


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图3 ROC曲线分析TTP对预测MRSA和MSSA的价值

100-特异性(%)

讨论

血培养仪阳性报警后的传统操作是涂片镜检,向临床报告初步结果。然后传代培养,进行菌株鉴定和药物敏感性试验,此过程通常需要2 d时间。当涂片结果显示为葡萄球菌时,快速区分SA和CoNS对临床治疗具有重要意义。因为CoNS大多为皮肤表面污染菌,且致病力弱,早期报告CoNS可避免不必要的抗菌药物使用[3,4]。本研究结果表明,TTP≤16.90 h可作为区分SA和CoNS的切点,准确性为中等,与文献[8]结果基本一致。本方法的准确性虽然仍有待提高,但其具有简便、快速、成本低廉的优点,可为临床提供初步的检测信息,指导抗感染早期的用药选择。因此可将TTP与其他反映早期感染、炎症的实验室指标(如白细胞分类计数、降钙素原、C反应蛋白等)综合分析,以尽早得出正确诊断。

由于临床上对MRSA感染的治疗方案不同于MSSA[5],因此,早期区分MRSA和MSSA具有重要意义[9]。在有关大肠埃希菌和鲍曼不动杆菌的研究中发现,具有不同耐药表型的同种细菌TTP会有不同[10,11],因此,我们推测MRSA与MSSA的TTP可能也存在差异。在本研究中虽然MRSA与MSSA的TTP差异有统计学意义,但ROC曲线表明其准确性较低。本研究结果与文献结果[11]不同,这可能是由于MRSA与MSSA不同耐药表型引起的TTP差异虽然有统计学意义,但他们的差异不大,导致用TTP区分二者的准确性较低。但这仍需要更大样本量的研究进行验证,以及通过绘制细菌生长曲线来比较不同MRSA与MSSA菌株生长速度的差异。

TTP的应用存在一些局限性。如采血后少数血培养瓶未能及时运送、上机,在室温长时间放置会影响TTP。因此,本研究采用较大样本量,以尽量降低少数血培养瓶由于长时间放置对TTP造成的影响。此外TTP与细菌初始浓度(即接种量)有关,在实际操作中难以达到每个血培养瓶的接种量完全一致,因此,也会对TTP造成一定影响。

参考文献
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(责任编辑:xgh)

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