HIV阳性疑云 ——嗜异性抗体对HIV测定干扰1例

作者 | 邓超 陈淑芳  蔡栋昊  钟广智

单位 | 广东省第二中医院检验科

在免疫学测定中，干扰检测结果的因素很多，嗜异性抗体的存在就是其中之一。嗜异性抗体一般无明确的免疫原，可以通过非特异性结合免疫球蛋白的Fc和Fab表位，桥联捕获抗体、标记抗体或标记抗原从而干扰测定(如图1)。嗜异性抗体干扰在日常工作中容易被忽视，为保证检验质量的准确可靠，我们应加深对嗜异性抗体的了解，并采取合适的方法消除其干扰。

图1

2018年7月26日，患者A,女，57岁，因“左乳癌术后20年，确诊左胸壁复发1周”入院，辅助检查未见明显内脏转移，拟行肿物切除以减瘤。患者术前感染常规检查结果如表1：

表1 患者第一次术前感染常规检查结果

*检测仪器：雅培ARCHITECTI2000SR；检测方法：化学发光微粒子免疫检测法

患者HIV初筛阳性，根据《全国艾滋病检测技术规范（2015年版）》要求重新抽取干燥管进行复检，化学发光法第二次复核结果为112.33 S/CO,另一种方法胶体金法检测结果为阴性，属于一阴一阳，患者遂外送疾控中心进一步做确证试验，患者HIV结果按照初筛实验室规范报告为“HIV感染待确定”。

为此，临床取消原定的手术计划。2天后，患者确证报告返回，检测结果为“HIV抗体阴性”，临床于当天下午执行手术，较原定计划推迟了3天。

2021年8月11日，该患者以“左乳癌术后胸壁复发3年余，拟行化学药物治疗”为主诉再次入院，患者术前感染常规检查结果如表2：

表2 患者第二次术前感染常规检查结果

*检测仪器：雅培ARCHITECTI2000SR；检测方法：化学发光微粒子免疫检测法

患者HIV初筛依然为阳性，处理方式同上述流程，化学发光法复查结果为35.13S/CO,胶体金法结果仍为阴性，确证试验结果仍为“HIV抗体阴性”，化疗手术较原定计划推迟。

本实验室的HIV筛查方法主要为第四代不区分抗原抗体的化学发光法，具有高度的灵敏性，日常工作中偶尔也会遇到一些位于灰区的假阳性结果，但S/CO值通常介于1-10之间，结果大于100S/CO的假阳性结果还是首次遇到。

患者在2018年首次出现HIV假阳性结果时，笔者分离了患者血清，用不同检测方法、不同检测平台对标本进行多次检测比较，为进一步搞清真相，联系了厂家的技术工程师，送至厂家技术研发中心进一步检测干扰因素，具体检测结果详见表3-5：

表3 患者标本在本院不同检测方法的结果比较

表4 患者标本在不同检测平台或不同院区同一检测平台的结果比较

表5 患者标本在雅培研发中心使用嗜异性抗体阻断剂前后结果的比较

*注：HBT为嗜异性抗体阻断试管（Scantibodies Laboratory公司生产）HBR为嗜异性抗体阻滞试剂；18090601为患者血清，HIV P1为HIV阳性质控。

通过表3-5可发现，患者的血清存在嗜异性抗体，并且该干扰主要对雅培检测系统产生较大影响，罗氏电化学发光平台、胶体金法、ELISA法未造成影响。

雅培公司的HIV检测方法为夹心法，是相对易受到嗜异性抗体干扰的方法之一，其试剂说明书也明确提到“人血清中的嗜异性抗体可与试剂中的免疫球蛋白发生反应，干扰体外免疫测定。经常与动物或动物血清产品接触的患者，其样本可能容易受到此干扰，并使检测结果出现异常值，可能需要其他信息用于诊断”。患者血清经过嗜异性抗体阻断试管（Scantibodies Laboratory公司生产）有效阻断后，干扰基本消除，得到符合临床的阴性结果。

2021年患者再次入院筛查时发现HIV ag/Ab已经下降至33.04 S/CO(仍为有反应性)，鉴于HIV检测的特殊性和严肃性，检验科按常规流程外送疾控中心进行确证实验，确证结果如大家所料，为“HIV抗体阴性”。

另外，笔者曾了解到本实验室使用的希森美康D-二聚体测定试剂盒中的一种补充试剂含有嗜异性封闭试剂（如下图2），那么我们是否可以用这种补充试剂中和患者血清中的嗜异性抗体？

图2（D-二聚体试剂组成成分）

参考部分商品化嗜异性抗体阻滞剂的使用方法，我们将患者血清与补充试剂1：1混合，37℃孵育60分钟，重新检测。测定结果如下：见表6

表6 患者标本在本院不同检测方法的结果比较

注意：雅培HIV试剂说明书的样本稀释程序ARCHITECT HIV抗原及抗体联合检测不能使用稀释过的样本，故稀释后的结果仅作参考，不作为患者最终报告结果。

试验结果表明，D-二聚体测定试剂盒中的具有降低嗜异性抗体干扰作用的补充试剂，消除干扰效果良好，经过试剂处理后血清的HIV检测为无反应性，而不含有嗜异性抗体的阳性质控物的结果则与试剂处理后的结果一致。这也可能与嗜异性抗体的来源有关。

虽然谜团早已显现，但患者体内的嗜异性不能消除的话，始终会对其今后的就医和临床诊治带来风险与不便，拖慢治疗，且由于HIV的特殊性，会对患者的心理造成压力，患者在本院两次术前筛查的经历就是一个典型的例子。

嗜异性抗体（heterophilantibod，HA）的产生通常是由于人类直接接触到动物、污染的食品、未经高温消毒的鲜奶和免疫疗法或者接种来源于动物血清或组织的疫苗产品后产生。在大多数情况下，直接接触宠物小鼠或实验室小鼠是导致人体产生HA最常见的原因。研究发现，存在人体中的HA包括天然抗体和自身抗体。大多数的HA属于天然抗体，为干扰的主要类型。

如今社会发展迅速，很多家庭会饲养会养宠物，而宠主与宠物的日常生活中，相互接触是不可避免的，因而，在临床检验上，HA对检验结果的影响越发的多见，因此检验人要学会判断在异常检验结果中是否存在嗜异性抗体的干扰。

当检测结果如果存在以下情形时：1）检测结果与临床表现、临床资料不符；2）检测结果与其他相关检测项目结果不一致；3）与患者既往结果相差甚远且无法解释；4）患者有动物接触时或近期免疫接种、输血或者接受单克隆抗体治疗等，均应该考虑HA的存在。

识别到了标本存在嗜异性抗体的干扰后，为提供临床提供更准确的结果，检验人应积极消除嗜异性抗体干扰，通常消除方法有以下几种：

1、稀释法：如果被检测的抗原或抗体浓度足够高，且样本中HA浓度含量不是很高，而HA所造成的干扰不是很大时，稀释法是可以减少HA的干扰，但不能完全消除。部分试剂不能使用稀释后的样本检测，注意选择。

2、使用嗜异性抗体阻断试剂或阻断管，如，HBR，作为一个商业化的特异阻滞剂，它几乎包含所有鼠亚基的鼠单克隆IgG。

3、更换一种检测方法：不同厂家生产的鼠单克隆抗体存在一定差异，使得嗜异性抗体的干扰不尽相同，所以使用另外一个检测系统可能会得到较为准确的结果。

临床上很难完全避免嗜异性抗体干扰，对于某些特殊项目，如HCG、HIV、梅毒等有其特殊的严肃性，假阳性和假阴性结果都将产生严重的后果。因此，检验工作者应谨慎对待检验前、检验中、检验后的每个环节，尽最大的可能降低嗜异性抗体带来的不良影响，我们因该做到：

1、重视免疫学检测，了解免疫学方法的原理以及各个因素的干扰机制。

2、合理运用试剂说明书：试剂说明书上大多都有该试剂适用的标本类型、干扰及交叉反应以及局限性，认识到各个项目各个试剂不同方法学的局限性。

3、尽可能丰富实验室检验技术：在同种项目上增添多种方法（如：化学发光法、电化学发光法、ELISA、蛋白印迹法、金标法等）、多种系统（如：雅培检测平台、罗氏检测平台等）、多种试剂（如：珠海丽珠、罗氏、雅培等）等。

4、完善检验流程，判断干扰因素，制备可行的消除干扰的方案（常备HBT管、完善与规范稀释流程等），确定完备的复查流程。

5、积极与临床和患者沟通，了解患者的诊疗情况以及生活史。

在日常的免疫测定中，影响结果检测的干扰因素很多，如嗜异性抗体、自身免疫抗体、类风湿因子等。本实验证明，在部分检测平台上，HA的干扰可造成HIV检测呈现假阳性结果，对这些与临床不符的检验结果，我们需要结合患者及样本等情况去排除各种可能性。由于标本中的HA来源是未知的，我们可以通过稀释、嗜异性抗体阻断剂、PEG沉淀、提取等方法尽可能消除HA的干扰。

点评专家：广东省第二中医院检验科副主任技师李蔼文

参考资料

[1]韦维,戴盛明.嗜异性抗体在免疫测定中干扰的研究进展[J].国际检验医学杂志,2010,31(10):1123-1126.

[2]蒋利君,黎宇,戴盛明.嗜异性抗体对免疫测定干扰的研究进展[J].分子诊断与治疗杂志,2010,2(01):68-72.