肌酐检测标准化

肌酐（creatinine，CRE）是人体肌肉代谢的产物，包括外源性和内源性两种，在正常情况下，人体内肌酐的含量基本稳定。若肾脏功能受损时，肌酐的正常排泄受到阻碍，致使血清中肌酐含量增加，血清中肌酐含量升高意味着肾功能受到损害，因此血清肌酐是肾脏功能的重要指标。本期对话，金宝请来了冯仁丰教授同大家分享肌酐检测相关的热点话题。

01

金 宝：目前检测肌酐的分析大致上有几个方法？

冯教授：环绕克服干扰问题，肌酐检测的方法学从历史上开始大致上可以分为：Folin的去蛋白Jaffe反应检测；1960年代起不除蛋白的Jaffe直接检测终点法；Jaffe速率法（未补偿Jaffe方法）；Jaffe速率法（补偿Jaffe方法）；采用系列酶的比色法（酶法，以罗氏产品为代表）；强生干片酶法等（干片酶法）。  

02

金 宝：从上世纪50年代起，推出的自动化肌酐检测方法，与以往相比有什么不同？    

冯教授：先打个比方，以往早餐吃豆浆是一定要处理黄豆，将黄豆浸泡、磨成浆、分离去除豆渣、煮沸豆浆后饮用。经典肌酐碱性苦味酸方法是，必须将肌酐从样品中分离（这是当时检验条件很差之故），然后在加入碱性苦味酸反应、比色测定。今天家用的豆浆机，实际上是将浸泡的黄豆一起打碎后，不过滤直接煮沸后，就吃了！这表面上看起来像一杯豆浆，其实是混合物。

自动化要求推动直接使用样品。临床实验室依然必须检测肌酐！但是检测的样品是肌酐在内的一个复杂混合体！即需要直接采用血清或血浆的肌酐Jaffe反应方法。为了可直接检测，不出现因蛋白存在产生沉淀，可用即可，为此调整碱性苦味酸内各个组分的用量、以及调整样品和试剂的比例等。为了避免出现蛋白沉淀，也使用了表面活性剂，但自动化初期阶段还是Jaffe反应的终点法。

很快就认识到样品中的蛋白为主的非肌酐组分，对肌酐结果影响很大。出现了使用以血清为基础的校准品，作为肌酐克服基质效应的措施出现了，开始研究Jaffe反应过程，确定肌酐与碱性苦味酸反应很快，干扰作用反应则慢得多，提出反应初期的Jaffe反应速率法检测肌酐。这应该是现今依然被广泛使用的分析仪上的肌酐Jaffe反应的检测方法基础。

现今的直接肌酐Jaffe反应检测，所有的检测方法全部为反应初期的速率法。大多采用了以血清为基础的校准品，都采用或宣称SRM 914a为原始第一标准，对报告结果不做任何数学处理（即为非补偿Jaffe方法）。所有现今的碱性苦味酸检测方法，均宣称：反应线性良好，是速率法，可溯源至SRM914a，与其他公司产品具有良好的相关等。

03

金 宝：肌酐检测现状如何？    

冯教授：临床需要准确的血清肌酐检测用于计算估计肾小球滤过率(eGFR)很关键，关系到全球卫生保健，致力于改善慢性肾病的诊断和治疗。校准的标准化，如实施校准的溯源性至较高等级的参考检测方法和参考物质，但不能纠正大量常规方法的分析干扰（非特异性偏倚）。补偿的Jaffe方法假设了非肌酐的色素干扰在样品间是恒定的，这过于简单了。尽管得到的结果与参考方法（核素稀释-质谱分析）很接近；使血浆蛋白的假性肌酐影响最小，但无法回避碱性苦味酸方法对非肌酐色素的敏感性。

罗氏公司目前的补偿肌酐方法和酶法，都已经将患者样品的检测结果可溯源至ID/MS（核素稀释质谱法）。但是，必须注意：不可随意将罗氏的补偿法与酶法互相进行患者样品检测结果的比较！罗氏永远是：补偿法的自行比较！或是酶法不同系统间的自行比较！ 

全世界所有诊断产品公司的肌酐检测，都声称他们的肌酐检测具有溯源性！但是，常规方法的分析非特异性，即没有能力真正检测单一肌酐的，实施溯源性不能解决与检测非特异性有关的分析干扰。因为标准化没有纠正分析非特异性问题。

04

金 宝： 肌酐检测标准化的趋势将如何？     

冯教授： 肌酐的溯源性   

也许在国内的任何一个实验室，使用的肌酐检测试剂盒，还找不出认为没有溯源性的！这是大家的回答。自选试剂盒、任意搭配校准品，试剂厂商显示的报批文件证实说：我国的药监部门认可了他们的试剂盒具有溯源性、他们的校准品有溯源性。你承认吗？在溯源性认识上模糊、错误的情况，从国家到省市药监审批部门，到ISO 15189的实验室认可组织、到基层的临床实验室，简直一团糟！     实现溯源性是针对实验室对新鲜病人样品检测结果的。要使检测结果具有溯源性，一定要使用具有溯源性的检测系统。即：仪器、试剂盒、校准品、操作程序固定组合为检测系统。这个固定的检测系统经与参考系统的新鲜病人标本比对，获得国际认可具有溯源性证书的，才有资格认为具有了对病人样品可以检测出实现溯源性的可靠结果。历史上，肌酐检测一直使用美国标准和测量研究院   [NIST，原美国国家标准局（NBS）]   发布了SRM 914a为肌酐参考纯物质起，所有试剂盒厂商立即以该标准参考物质为准，校正自己的肌酐标准液。以这样的做法，在美国、在我国，都很快就认可了：不论试剂盒的方法学反应原理，只要标准液以SRM 914a校正的，都被认可。进而，也变成了具有溯源性。标准液是这样，以血清为基础的校准品的定值，只要可追溯源至SRM 914a的，都被说成有溯源性。     

肌酐“溯源性”≠病人标本结果的可比性   

现实问题是：病人标本的肌酐检测结果间一直对不拢。实验室间的室间比对表面上很好，可惜国内的这样的比对无法相信：调查标本不是天然患者标本、实验室间互相通气严重。     就是非常正规的大公司，如罗氏诊断，他们提供了肌酐的Jaffe方法、Jaffe补偿方法、酶法等试剂盒。它们均有溯源性，但是互相间有很明显的差异。     

全球趋势   

由于Jaffe试剂成本实在便宜，酶法试剂要贵得多，全球依然留恋廉价的Jaffe试剂，想尽办法予以保留，近期的所谓校准补偿的Jaffe速率   （扣除空白速率）   方法便是一个代表。酶法的分析性能已经被大众认可，对病人标本的检测结果可靠性基本被肯定。是成本第一，还是质量第一是当今的呼声。相信随着我国经济发展，临床需要真正的肌酐结果，必然会使肌酐检测方法向酶法转移。期望临床实验室不要再等待，为了广大肾病患者的利益，尽早使用酶法检测肌酐。